免疫层析试剂精密度研究中的变量设计与显色一致性评价

国家药品监督管理局医疗器械技术审评中心近日发布了《以免疫层析法为检验原理的定性体外诊断试剂进行精密度研究时有哪些考量因素》的共性问题解答：

对于以胶体金法等免疫层析法为检验原理的定性体外诊断试剂，在进行精密度研究时，应考虑不同样本浓度、试剂批次、检测轮次、时间、操作者、地点等影响因素进行实验设计。在检测结果中，不仅需要提交阴阳性结果，还应提交与标准色卡比对的数据（例如L1、L2、L3……），并对显色强度进行一致性分析。

我们来对其进行解读：

在胶体金试剂分析性能评估中，精密度（Precision）往往被误认为是定量试剂的专属指标。对于“一条杠”或“两条杠”的定性试剂，很多研发人员习惯简单地统计“阴/阳”符合率。然而，CMDE 此次明确指出：对于免疫层析试剂精密度研究，仅仅看阴阳性是不够的，必须引入“半定量”的评价维度。

实验设计：拒绝“理想环境”

首先，法规要求精密度实验不能仅在单一条件下“连测10次”。为了验证试剂在各种潜在干扰下的鲁棒性，实验设计必须引入变量：

• 内部变量： 必须包含不同的“样本浓度”（如弱阳性、强阳性）和不同的“试剂批次”。
• 外部变量： 必须引入不同的“检测轮次/时间”（考察天间精密度）、不同的“操作者”以及不同的“实验地点”。

这实际上是在要求企业进行“再现性”（Reproducibility）考察，以确保试剂在不同医院、不同医生手中都能跑出稳定的结果。

结果报告：从“定性”走向“半定量”

这是本次解答中最具挑战性的要求。以往，定性试剂的精密度数据表通常只记录“+”或“-”。但 CMDE 现在要求提交“与标准色卡比对的数据”。

这意味着，在进行体外诊断试剂注册申报时，研发人员需要建立一套标准色卡（例如定义 L1 为极弱阳，L5 为强阳），并在精密度实验中记录每一条试纸条的显色强度等级。例如，对于同一种弱阳性样本，10次测试的结果如果都在 L2-L3 之间跳动，是可接受的；但如果出现了 L1（极弱）甚至 L5（强阳）的跳变，即使最终判定都是“阳性”，其显色强度的一致性也是不合格的。

钦思观点

显色均一性是产品质量的试金石。 这一要求迫使企业必须关注层析膜的均一性、金标喷涂的稳定性等工艺细节。建议企业在撰写体外诊断试剂说明书和分析性能报告时，务必保留好原始的色卡比对记录或T线强度读数（如有仪器读数）。“全阳”不代表精密度好，只有“颜色深浅一致”才是真正的精密。